山羊GnRH elisa檢測試劑盒夾心法
發(fā)表時間:2025-05-14
山羊GnRH elisa檢測試劑盒夾心法:
(一)雙抗體夾心法
將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體;加入待測樣本,孵育使樣本中的抗原與固相抗體充分反應(yīng),形成固相抗體-抗原復(fù)合物,之后洗滌除去其他未結(jié)合物;加入標(biāo)記特異性抗體并孵育,使標(biāo)記抗體與固相抗體-抗原復(fù)合物結(jié)合,形成固相抗體-抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物(雙抗體夾心),洗滌除去未結(jié)合的標(biāo)記抗體;*根據(jù)不同的方法學(xué),加入不同的反應(yīng)物質(zhì)(如酶促底物、堿性溶液、氧化劑等),得到反應(yīng)信號;讀取信號,根據(jù)預(yù)先設(shè)定的COV或標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行定性或定量的結(jié)果判讀。
雙抗體夾心法易受干擾。常見的干擾物質(zhì)包括人抗動物抗體(HA)和類因子(RF),可造成假陰性及假陽性結(jié)果。在診斷檢測過程中,HA可結(jié)合多種類型的無關(guān)抗原,從而干擾抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng),如一個干擾抗體分子分別與固相抗體及標(biāo)記抗體結(jié)合,盡管樣本中沒有待測抗原的存在,標(biāo)記抗體通過干擾抗體連接到固相抗體,在洗滌過程中不會被洗去,因此產(chǎn)生了相應(yīng)的信號,造成假陽性結(jié)果;或干擾抗體分別與固相抗體及標(biāo)記抗體結(jié)合,占據(jù)固相抗體與標(biāo)記抗體上的特異性結(jié)合位點,造成無法產(chǎn)生相應(yīng)的信號,造成假陰性結(jié)果。
(二)雙抗原夾心法
原理與雙抗體夾心法類似,特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗原;加入待測樣本,孵育使樣本中的抗原與固相抗體充分反應(yīng),形成固相抗原-抗體復(fù)合物,洗滌除去未結(jié)合物質(zhì);加入標(biāo)記特異性抗原并孵育,是標(biāo)記抗原與固相抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合,形成固相抗原-抗體-標(biāo)記抗原復(fù)合物(雙抗原夾心),洗滌除去未結(jié)合的標(biāo)記抗原,加入反應(yīng)物質(zhì),判讀結(jié)果。