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細胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細胞之方法：
人脊索瘤細胞培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人脊索瘤細胞培養(yǎng)
種屬:U-CH1

形態(tài):間充質(zhì)樣，有空泡

提供形式:T25細胞培養(yǎng)瓶/凍存管

安全等級:1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:IMDM: RPMI1640 (4: 1) + 10% FBS + 1% L--glutamine

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

生長特性:貼壁生長

存儲條件:50% 完全培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO 液氮

細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到人脊索瘤細胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是人脊索瘤細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
大鼠視網(wǎng)膜muller細胞 100mL苯唑西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Oxacillin 質(zhì)量規(guī)格：標(biāo)準(zhǔn)品用于含量測定

F81貓腎細胞 F81 feline kidney cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS維E煙酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)(±)-α-Tocopherol nicotinate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

IL1RL1 Protein Mouse 重組小鼠 IL1RL1 / ST2 蛋白 (His 標(biāo)簽)熒光素-5-馬來Fluorescein-5-maleimide質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97.0%,進口

NCI-H295R(人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 Neuro-2A(腦神經(jīng)瘤細胞)Veliparib (ABT-888)Veliparib (ABT888)質(zhì)量規(guī)格：>98%

人細胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]萘夫西林鈉Nafcillin  salt monohydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
小鼠肥大細胞瘤細胞;P815 小鼠*導(dǎo)管上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL奎寧(>98%,BC)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BCQuinine

細胞名稱 種屬土耳其紅油質(zhì)量規(guī)格：BRRed oil

GDF10 Others Mouse 小鼠 GDF10 / BMP-3B 人細胞裂解液 (陽性對照) 倒千里光堿質(zhì)量規(guī)格：>90%,進分Retrorsine

小鼠樹突狀細胞低轉(zhuǎn)移細胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達);DG6-VAP33-GFP羅丹明B基(>97%,BS)質(zhì)量規(guī)格：>97%,BSRhodamine B base

GP1BB Others Rat 大鼠 GP1BB / CD42c 人細胞裂解液 (陽性對照) 降鈣素，人質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRCalcitonin, human
Promocell C-77110 Mitsuhashi/Maramorosh InsectMedium昆蟲細胞培養(yǎng)基 500mlxy7noGENPEROXIDEACS級500MLCOLD

人肺間充質(zhì)干細胞HPMSC硼分 Boron 7440/4/8

REG4 Others Rat 大鼠 REG4 人細胞裂解液 (陽性對照) Bromocresolgreenwo7iumsalt溴藍鈉25克BR，90%

大鼠食管平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL銻，英文名或英文縮寫：Antimony，級別：CP，98.5%，規(guī)格：500毫升

A7r5 大鼠胸大動脈平滑肌細胞 A7r5 rat thoracic aortic smooth muscle cells 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBSNHS-d-biotin 5mg 原裝/25mg 原裝 Sigma H1759
人脊索瘤細胞培養(yǎng)敘利亞倉鼠細胞系;Syrian Hamster AV12氧化鐵(III)(>98%,BC)Iron (III) oxide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC

Calu-3細胞，人(胸膜滲出液) 大鼠肝星形細胞,CFSC-8B細胞 CM-M089小鼠皮膚肥大細胞完全培養(yǎng)基100mL還原鐵粉(>98%,BC)ron powder reduced質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC

SiHa(人子宮頸鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2異佛爾酮(>Isophorone質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

HUVEC-c 單一來源的人臍內(nèi)皮細胞(HUVEC) 500,000cells 細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)異香草醛(>Isovanillin質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

真皮成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)異香草醛(標(biāo)準(zhǔn)品)Isovanillin質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品