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海藻糖酶(TREH)真核蛋白實驗原理

發(fā)表時間:2023-05-11
海藻糖酶(TREH)真核蛋白實驗原理
將海藻糖酶(TREH)抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的海藻糖酶(TREH)與連接于固相載體上的抗體結合,然后加入生物素化的海藻糖酶(TREH)抗體,將未結合的生物素化抗體洗凈后,加入HRP標記的親和素,再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的海藻糖酶(TREH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。
實驗流程
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100μL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100μL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100μL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90μL,37°C孵育10-20分鐘;

8. 加終止液50μL,立即450nm讀數。

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