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蛋白磷酸酶抑制劑混合液反應五要素

發(fā)表時間:2022-03-01
蛋白磷酸酶抑制劑混合液反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

內吞作用輔助蛋白EPN1抗體
內吞作用輔助蛋白EPN2抗體
內質網定位蛋白ERGI3抗體
內質網氧化物蛋白Ero1-Lα抗體
內質網蛋白ERp19抗體
內質網蛋白ERp72抗體
結核分枝桿菌分泌性蛋白ESAT6抗體
真核翻譯起始因子1抗體
上皮粘連調控蛋白ESRP2抗體
T細胞和嗜酸性粒細胞表達特應性皮炎蛋白ETEA抗體
電子轉移黃素蛋白脫氫酶抗體
EGF毒素受體7跨膜結構域蛋白1抗體
乙醇胺激酶2抗體
磷酸化Ets轉錄因子家族ets1抗體
磷酸化上皮細胞癌轉化蛋白2抗體
嗜酸性粒細胞過氧化物酶抗體
核酸內切酶G抗體
酪氨酸蛋白激酶受體A10抗體
胞吐囊復合體蛋白2抗體
磷酸化4E結合蛋白1抗體
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體
泛素交聯酶抗體
EB病毒核抗原抗體-3B抗體


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