如何選擇同型對照?
? 一般選擇與一抗的成分完全相同種屬來源、相同亞型和亞鏈、相同熒光標(biāo)記的抗體,比如抗人的CD56 FITC標(biāo)記的抗體,亞型是Mouse IgG1,κ,那么它的同型對照應(yīng)該是FITC標(biāo)記的Mouse IgG1,κ。
? 如果沒有找到適合的同型對照,在保持來源相同、熒光標(biāo)記相同、免疫球蛋白類別相同條件下,優(yōu)先選擇的順序是亞鏈不同--亞型不同--相同類別:比如,某抗體的來源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型對照表里找不到完全相同的同型對照,那么優(yōu)先選擇相同熒光標(biāo)記Mouse IgG2а為同型對照;如果也沒有找到Mouse IgG2а,那么優(yōu)先選擇相同熒光標(biāo)記的Mouse IgG2b作為同型對照;如果最后還是沒有找到Mouse IgG2b,那么選擇相同熒光標(biāo)記的Mouse IgG2作為同型對照。
? 如果是抗體的組合形式,純化的一抗+熒光標(biāo)記的二抗,那么應(yīng)該選擇一抗的同型對照。比如CD86的純化抗體,亞型是Mouse IgG1,κ,二抗是PE標(biāo)記的抗小鼠IgG1,那么它的同型對照是純化的Mouse IgG1,κ。染色方式如下:樣本管,純化的CD86+PE標(biāo)記的抗Mouse IgG1(二抗)+樣本;同型對照管,純化的同型對照+PE標(biāo)記的抗Mouse IgG1(二抗)+樣本。